夏日炎炎,酷熱的天氣使人心情煩躁,這個(gè)時(shí)候再來(lái)個(gè)操作繁瑣復(fù)雜的實(shí)驗(yàn)豈不是火上澆油。每到這種熱得都不想動(dòng)一下的時(shí)候,肯定有同學(xué)會(huì)想要是能“唰的一下”DNA就提好了那該多好啊。今天小新就為大家?guī)?lái)一款快速血液DNA提取試劑盒,與市場(chǎng)上常見(jiàn)的半小時(shí)操作時(shí)間起步的試劑盒不同,它的血液DNA提取時(shí)間縮短到了8分鐘,打破了原來(lái)一直由新景生物保留的15分鐘內(nèi)提取血液DNA(全血DNA小量試劑盒,Cat. No. 3003050)的記錄。更令人驚嘆的是:在8分鐘內(nèi)提取的還是600 μl血液中的DNA?。。∫老?/span>QIAGEN、天根等公司的血液DNA提取試劑盒,半小時(shí)提取的僅僅是200 μl血液中的DNA……接下來(lái)就讓我們看下這個(gè)產(chǎn)品具體是怎么做到的,以及提取效果如何。
一、實(shí)驗(yàn)材料
人全血(EDTA抗凝)、快速全血DNA小量試劑盒(Simgen Cat.No.3003050)、2×PCR Mix(Simgen Cat.No.7003100)、1.3 kb β-球蛋白引物(F:TTAGGCCTTAGCGGGCTTAGAC/R:CCAGGATTTTTGATGGGACACG)
旋渦振蕩器(越新儀器,XH-C)
臺(tái)式離心機(jī)(eppendorf centrifuge 5415 D)
超微量分光光度計(jì)(Simgen Cat.No.sim100)
電泳儀(北京六一儀器廠,DYY-6C型)
PCR儀(Techne FPROG5Y Progene Thermal)
二、實(shí)驗(yàn)步驟
(一)DNA提取
1. 在1.5 ml離心管中加入600 μl Buffer L7,再加入600 μl的全血(EDTA 抗凝),立即用力混合3~5次,使血樣生成褐色沉淀物,再旋渦振蕩30秒混合均勻,使沉淀物徹底分散開(kāi)來(lái)。
2. 13200 rpm離心1分鐘。
3. 將步驟2中的上清液全部倒入到核酸純化柱(核酸純化柱置于2 ml離心管中)中,蓋上管蓋,12000 rpm離心30秒。
4. 棄2 ml離心管中的濾液,將核酸純化柱置回到2 ml離心管中,在核酸純化柱中加入800 μl Buffer WB,蓋上管蓋,12000 rpm離心30秒。
5. 棄2 ml離心管中的濾液,將核酸純化柱置回到2 ml離心管中,13200 rpm離心1分鐘。
6. 棄2 ml離心管,將核酸純化柱置于一個(gè)潔凈的1.5 ml離心管中,在純化柱中加入100 μl Buffer TE,蓋上管蓋,室溫靜置1分鐘,12000 rpm離心30秒得到全血DNA。
(二)PCR擴(kuò)增
PCR擴(kuò)增體系:
擴(kuò)增程序:
94℃,5 min,{94℃,45 sec;55℃,45 sec;72℃,1 min 30 sec}×30 cycles,72℃,10 min。
三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
1. 在超微量分光光度計(jì)上用Buffer TE調(diào)零,測(cè)量提取的DNA,結(jié)果如下:
2. 在1%的瓊脂糖凝膠上加入5 μl提取的DNA/擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳,結(jié)果如下:
四、分析與討論
1. 從操作步驟可以計(jì)算出實(shí)際標(biāo)明的時(shí)間總共是5分鐘,加上步驟銜接過(guò)程需要損耗的3分鐘,8分鐘完成血液DNA提取貨真價(jià)實(shí),確實(shí)沒(méi)有夸張成分。好奇心強(qiáng)的小伙伴還可以掃描二維碼觀看真實(shí)的操作視頻:
2. 從濃度測(cè)量結(jié)果和圖1電泳結(jié)果可知,用快速全血DNA小量試劑盒提取到的全血DNA純度好,濃度高,條帶清晰完整,無(wú)降解現(xiàn)象。
3. 由圖2可知,在40 μl擴(kuò)增體系中用18 μl提取的DNA(過(guò)量模板測(cè)試)作為模板進(jìn)行擴(kuò)增,擴(kuò)增結(jié)果與陽(yáng)性對(duì)照一致,并無(wú)觀察到明顯的抑制效果,進(jìn)一步說(shuō)明用快速全血DNA小量試劑盒提取到的全血DNA純度好,抑制物少,完全能滿足后續(xù)實(shí)驗(yàn)需求。
所以,趕緊向我司及Simgen的經(jīng)銷商們申請(qǐng)免費(fèi)的試用裝,體驗(yàn)快速(8分鐘)、大量(多至600 μl)提取到高純度全血DNA的美好過(guò)程吧----Simgen快速全血DNA小量試劑盒,讓實(shí)驗(yàn)變得更簡(jiǎn)單、更快捷。
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·樣品用量少,無(wú)需稀釋,無(wú)需比色皿·紫外-可見(jiàn)光全波長(zhǎng)掃描(200~850nm)·無(wú)需預(yù)熱,隨開(kāi)隨檢,速度快,直接顯示濃度值·樣品的濃度范圍是常規(guī)紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)的50倍·數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)軟件簡(jiǎn)單容易掌握 查看產(chǎn)品
· 新穎快捷的使用感受,提取600μl血樣,只需一次過(guò)柱,一次洗滌· 不需要紅細(xì)胞裂解液的使用· 不需要蛋白酶K消化、添加乙醇等繁瑣步驟· 專利技術(shù)開(kāi)發(fā)的裂解液兼有溶解血液、釋放DNA、沉淀血紅蛋白三項(xiàng)功能· 特別設(shè)計(jì)的純化柱使得通常需要三次純化柱的洗滌步驟精簡(jiǎn)為一次洗滌 查看產(chǎn)品