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糞便細(xì)菌DNA提取方法

作者:新景實(shí)驗(yàn)室
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1. 0.2-0.5g糞便置于Ep管中(冰水浴),加入1mlPBS,漩渦振蕩混勻,200xg離心5min,取上清,冰水?。?/span>

2. 向沉淀中加入1mlPBS,重復(fù)步驟1;

3. 混合兩次上清,用300g離心5min,棄沉淀;

4. 兩次上清用10000rpm離心8min,沉淀菌體;

5. 所得沉淀用1mlPBS洗滌至上清無色;

6. 20過夜;

7. Ep管中加入500ulDNA提取液,6ul蛋白酶K,37搖床160rpm40min,再加入56ul20%SDS,65條件下水浴2h,每隔15-20min輕搖Ep管;

8. 等體積酚/氯仿抽提,8000rpm離心10min,取上層水相,重復(fù)兩次,除凈蛋白;

9.  0.6倍體積異丙醇沉淀DNA,12000rpm離心10min4);

10. 70%乙醇洗滌DNA沉淀兩次,自然干燥;

11. 沉淀中加入15ulTE,在37孵育箱中孵育30min。