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細(xì)菌總RNA提取方法

作者:新景實(shí)驗(yàn)室
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1. 挑取大腸桿菌菌單菌落,培養(yǎng)至穩(wěn)定期,取菌液 2.0 mL 2.0 mL離心管離心得菌體。

2. 每管加入 1 mL Trizol 溶液,蓋緊管蓋,激烈振蕩15 s,室溫靜置5 min 4,12000 g,離心 10 min;取上清轉(zhuǎn)入( 1 mL)新的 2.0 m L離心管中。

3. 每管加入 0.2 mL 的氯仿(0.2倍 體積 Trizol),蓋緊蓋,劇烈振蕩 15 s;室溫靜置 3 min;4, 12000 g, 離心 10 min;小心吸取上層水相,轉(zhuǎn)入另一新的 2.0mL 離心管,測(cè)量其體積;(加氯仿時(shí)應(yīng)充分震蕩使其充分乳化。)

4. 加入1倍體積的氯仿,蓋緊蓋,劇烈振蕩 15 s;室溫靜置 3 min;412000 g,離心 10 min;小心吸取上層水相,轉(zhuǎn)入另一已編號(hào)新的 2.0mL 離心管。

5. 加入 0.5 mL 的異丙醇(0.5 倍體積 Trizol),輕輕顛倒混勻;室溫,靜置 10 min;412000 g,離心 10 min,RNA 沉于管底;小心吸去上清。

6. 1 mL75%的乙醇(預(yù)冷),并輕柔顛倒,洗滌沉淀;4,7500 g,離心 5 min。

小心棄上清,微離,吸去剩余乙醇,室溫干躁 10 min

7. 各管用 30μL DEPC 處理過的雙蒸去離子水溶解,55-60溫育5 min,分裝,-80貯存(可貯存5)。