答：

可能的原因：

1） Buffer W2中未加入無水乙醇，應按比例補加無水乙醇。如果是錯誤地加入了其他試劑，請向我公司技術部尋求幫助。

2） Buffer W2中錯誤地加入了70%乙醇。請向我公司技術部尋求幫助。

3） 細菌培養(yǎng)物中污染有真菌或其他雜菌（！注意：只針對原核生物起作用的抗生素對真菌無效）。確保從新鮮制備的含抗生素的平板中挑取單克隆菌落接種培養(yǎng)。

4） 質粒未轉化到宿主菌中。確保從新鮮制備的含抗生素的平板中挑取單克隆菌落接種培養(yǎng)，并確保在培養(yǎng)基中加入對應的抗生素。

5） 不要吸取儲存的甘油菌直接進行細菌培養(yǎng)。具體參考第3頁“起始樣本”內容。

6） 分離純化的是低拷貝質粒。請選擇質粒小提中量試劑盒，加大菌液用量提取質粒DNA。

7） Buffer II有白色沉淀產生。如有沉淀則應將Buffer II置于37℃水浴直至沉淀溶解后再使用。

8） Buffer II使用完后未蓋緊瓶蓋，與空氣長期接觸導致溶菌效率下降。請制備新鮮的Buffer II：1% SDS, 0.2M NaOH。

9） 菌體未懸浮充分。菌體未懸浮充分前勿加入Buffer II。

10） 錯誤地使用了Buffer W1和Buffer W2的洗滌順序。確保按正確的順序洗滌純化柱。

11） DNA的洗脫效率差。參考第5頁柱純化技術中的第4點“洗脫質粒DNA”內容優(yōu)化DNA的洗脫方案。

質粒上插入的基因的表達產物對細菌有毒性，影響了細菌的正常生長。