采用強(qiáng)烈的裂解液溶解并沉淀去除血紅蛋白和基因組DNA,用不同孔徑的純化柱吸附血液中的RNA或miRNA
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用戶需自備的試劑與物品
1. 無水乙醇
2. RNase-free的1.5 ml離心管或2 ml離心管
3. 移液器吸頭(為避免RNA酶的污染,請選用含有濾芯的RNase-free移液器吸頭)
4. 乳膠手套、一次性口罩等防護(hù)用品和紙巾
5. 臺式小量離心機(jī)(可配離心1.5 ml離心管和2 ml離心管的轉(zhuǎn)子)
6. 旋渦振蕩器
7. 不使用RNA酶的實(shí)驗(yàn)室
使用前準(zhǔn)備
1. 如果離心機(jī)有制冷功能,請將溫度設(shè)置到25℃。
2. 根據(jù)試劑瓶標(biāo)簽上的指示在Buffer WA和Buffer WBR中加入無水乙醇,并在標(biāo)簽的方框中打勾作好“乙醇已加”的標(biāo)記。
3. 由于唾液、皮膚上均含有RNA酶,請?jiān)?/span>RNA提取的全過程中都戴口罩和乳膠手套。
4. 盡量使用離體3小時(shí)內(nèi)的新鮮全血或者骨髓進(jìn)行RNA提取,否則將因?yàn)?/span>RNA的降解而影響最終miRNA的回收效率。如果不能及時(shí)將新鮮的全血進(jìn)行RNA提取,可將全血用Buffer L9溶解后于﹣20℃或者更低(﹣70℃)凍存。(詳見步驟1)