隨著基因健康體檢的普及，獲取人的DNA從最常見(jiàn)的血液中DNA提取，逐步改為從口腔拭子中提取，最后變成了從唾液中提取DNA。相應(yīng)的，獲取人的RNA也提出新的需求，希望從血液中提取改為從唾液中提取。

看似簡(jiǎn)單的一個(gè)樣本變換需求，RNA的提取難度上卻大大地提高了。

首先，唾液是一個(gè)含大量細(xì)菌的混合液，1 ml唾液大約含1億個(gè)細(xì)菌，其次唾液中還含有大量的消化酶（最討厭的是含有RNA酶）、溶菌酶、免疫球蛋白、各種無(wú)機(jī)鹽離子以及白細(xì)胞、口腔脫落細(xì)胞、甚至包括病毒。在這一堆混合物中，真正我們所需要的是口腔脫落細(xì)胞及白細(xì)胞中的RNA，如何躲避RNA酶的攻擊，去除基因組DNA，提高RNA的回收效率，是提取唾液中RNA的三大難點(diǎn)。

針對(duì)上述難點(diǎn)，我們逐一采取了相應(yīng)的應(yīng)對(duì)措施：

1. 由于唾液中富含RNA酶，收集的唾液如果用于RNA提取必須立即滅活RNA酶，不能像血液一樣放置幾小時(shí)后再提取RNA。所以我們特別選擇了配套的唾液采集器，采集唾液后可立即混入裂解液，終止RNA酶的活性。

2. 由于基因組DNA比RNA更長(zhǎng)，更粘稠，所以可以用特殊的過(guò)濾柱過(guò)濾唾液的裂解物，高效除去基因組DNA，卻不損失RNA的數(shù)量。

3. 如果從唾液中富集口腔脫落細(xì)胞或白細(xì)胞，必定會(huì)增加操作步驟，延長(zhǎng)RNA酶攻擊RNA的時(shí)間，因此我們采取的方案是盡可能大體積地一次性提取RNA，但是由于RNA含量低，醇沉淀RNA根本不可行，所以采用核酸純化柱富集、純化RNA。

現(xiàn)將設(shè)計(jì)的唾液RNA提取方法公布如下：

我們用微量分光光度計(jì)來(lái)估計(jì)我們獲得的2個(gè)唾液中RNA的質(zhì)量：

總體來(lái)說(shuō)OD₂₆₀/OD₂₈₀接近2.0，純度很好，但是OD₂₆₀/OD₂₃₀比值很低，可能有鹽分殘留，但也不排除因?yàn)?/span>RNA濃度低，OD₂₆₀ 嚴(yán)重偏小所造成的假象。

用上述提取的唾液RNA擴(kuò)增下β-actin，效果還是不錯(cuò)的：

最后要補(bǔ)充的是，由于RNA的總量還不到1μg，在提取唾液RNA的過(guò)程中可以添加適量的Carrier RNA, 以提高最終RNA的回收效率。