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真菌菌絲PCR
實驗目的
通過不同的方法處理真菌菌絲并進行PCR，看是否能擴出條帶。
實驗設備與材料
快速DNA提取檢測試劑盒（simgen）、
2×Taq Plus PCR Master Mix（simgen）、
水浴鍋（XMTD-6000，上海宜昌儀器紗篩廠）、
離心機（5452，德國eppendorf股份公司）、
PCR儀（A-80343,Progene）、
漩渦振蕩儀（XH-C，金壇市醫(yī)療儀器廠）。
實驗方法及步驟
方法1：使用快速DNA提取檢測試劑盒
取真菌菌絲與潔凈的1.5ml離心管，加100μl裂解液，用研磨棒將菌絲研磨破碎，再加10μl蛋白酶K混勻，56℃水浴10min，95℃水浴5min（由于蛋白酶K會消化Taq酶，所以要使蛋白酶K失活，以免Taq酶被消化），取75μl 上清作為PCR模板待用。
配置PCR擴增體系，加1/10體積模板進行PCR擴增
組成成分 | 使用量 |
2×Taq Plus PCR Master Mix | 20 μl |
Primer 正向（10 μM） | 1μl |
Primer 反向（10 μM） | 1μl |
ddH2O | 14μl |
模板 | 4μl |
方法2：直接PCR
配置PCR擴增體系，將菌絲直接加入體系中進行PCR擴增
組成成分 | 使用量 |
2×Taq Plus PCR Master Mix | 20 μl |
Primer 正向（10 μM） | 1μl |
Primer 反向（10 μM） | 1μl |
ddH2O | 18μl |
模板 | 菌絲 |
擴增程序：
擴增產物4℃保存。
取PCR產物進行電泳
實驗結果
·產品中添加的Taq酶抗體、PCR增強劑和蛋白穩(wěn)定劑協(xié)同提高了PCR效率和靈敏度·Taq和Pfu酶協(xié)同作用，既兼顧了擴增產物的高保真性，又保證了擴增片段的長度，可以從基因組DNA中擴增出長達4kb的片段或者從λDNA中擴增出長達5kb的片段 查看產品
·提取過程無需液氮研磨、無需有機溶劑抽提，無需無水乙醇沉淀，簡便、快捷，并且質量穩(wěn)定可靠 ·優(yōu)化的2× PCR Mix包容性強，在少量PCR抑制物存在的情況下仍能進行高效特異擴增·靈敏度高、特異性強、穩(wěn)定性好等特點，特別適合于高通量的篩選·&n 查看產品