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如何提取松杉綱植物樣本的DNA

作者:新景實驗室
版權說明:本文系原創(chuàng)文章 轉載請標注出處和本文鏈接

前段時間,小新在做植物DNA提取實驗時失敗了,重復實驗后還是沒有提取到DNA。當時使用的樣本是羅漢松的葉片,小新查了相關資料了解到羅漢松屬于裸子植物亞門松杉綱,這類植物都是復雜抗逆植物,核酸較難提取。于是小新就想到了植物/真菌DNA試劑盒,這款試劑盒在之前的文章中也出現過,當時提取的是真菌樣本。其實它不僅能提取復雜的真菌樣本,同樣也能提取復雜的植物樣本。

為了驗證植物/真菌DNA試劑盒確實能提取這類樣本的DNA,小新又選了3松杉綱植物(濕地松、雪松、水杉)進行對比實驗,下面就讓我們看看結果如何。

實驗目的

對比Simgen的兩種植物DNA提取試劑盒對松杉綱植物DNA提取效果的差異。

 

實驗材料:

1. 濕地松、雪松、水杉、一次性手術刀、研缽

2. 植物DNA試劑盒Simgen Cat.No.3201050、植物/真菌DNA試劑盒Simgen Cat.No.3200050

3. 超微量電子天平(DENVER INSTRUMENT,TP-213

4. 電子恒溫不銹鋼水浴鍋(上海宜昌儀器紗篩廠)

5. 旋渦振蕩器(越新儀器,XH-C

6. 臺式離心機(eppendorf Centrifuge 5415 D

7. 超微量分光光度計(Simgen Cat.No.sim100

8. 電泳儀(北京六一儀器廠,DYY-6C型)

實驗方法:

操作步驟如下:

simgen-植物DNA試劑盒-植物/真菌DNA試劑盒-操作步驟圖

實驗結果:

1、在超微量分光光度計上分別用各自試劑盒的Buffer TE調零,測量洗脫下來的DNA,結果如下:

洗脫下來的DNA測量結果

2、1%的瓊脂糖凝膠上,加入5 μl洗脫的DNA進行電泳,結果如下:

simgen-植物DNA試劑盒-植物/真菌DNA試劑盒-電泳圖一

simgen-植物DNA試劑盒-植物/真菌DNA試劑盒-電泳圖二

討論與分析:

1. 從濃度測量結果來看,可以明顯看到兩個試劑盒提取效果的差異。植物DNA試劑盒提取的DNA測得的濃度都極低,植物/真菌DNA試劑盒提取的DNA測得的濃度則遠高于植物DNA試劑盒提取的DNA。結合圖一、圖二的電泳結果可以進一步證明植物DNA試劑盒幾乎沒有提取到肉眼可見的DNA條帶,而植物/真菌DNA試劑盒則成功提取到了DNA。

2. 從圖一、圖二的電泳圖中可以看到植物/真菌DNA試劑盒提取的DNA中有明顯的RNA殘留,這也與測得的A260/A280比值相符合。一般新鮮樣本提取的DNA殘留有RNA是正常情況,并不影響后續(xù)實驗。若是想要徹底去除RNA ,可在水浴環(huán)節(jié)加入5 μl RNase A儲存液(50 mg/ml,Simgen Cat. No. 8001001)即可。

3. 從松杉綱植物葉片提取到的DNA濃度都不高,可能是該類植物葉片中含的纖維素比較高所導致。還好植物/真菌DNA試劑盒一次可以提取500 mg植物樣本中的DNA,后續(xù)可以用提高樣本用量的方法來彌補。

4. 對于水杉、濕地松、雪松3種植物來說,使用植物DNA試劑盒提取的效果不明顯,無法提到DNA,而使用植物/真菌DNA試劑盒后提取效果明顯,驗證了植物/真菌DNA試劑盒確實能提取松杉綱植物樣本的DNA。

 

植物DNA試劑盒操作步驟簡單,但面對有豐富衍生物的特殊植物樣本也有力不從心的時候。植物/真菌DNA試劑盒雖然操作步驟略微復雜,但對于有各種復雜衍生物的植物、真菌樣本卻都能應付,歡迎大家索要試用裝嘗試一下吧。