一、實驗目的:
檢測Simgen 病毒RNA純化試劑盒分離純化病毒RNA的效果。
二、實驗步驟:
1.使用Simgen 病毒RNA純化試劑盒從HCV血清中提取RNA(具體實驗步驟詳見說明書),將提取的RNA進行反轉錄及PCR擴增。
2.使用傳統(tǒng)Trizol法從HCV血清中提取RNA,將提取的RNA進行反轉錄及PCR擴增。
三、實驗樣本:
100μl,5×105 copies/ml的HCV血清。
四、實驗結果:
曲線1:用Simgen病毒RNA純化試劑盒從100 μl,5×105 copies/ml的HCV血清中提取的RNA作為模板檢測HCV所獲得的擴增曲線(RT-PCR一步法,50 μl擴增體系中加入25 μl純化的RNA)
曲線2:用傳統(tǒng)的Trizol法(添加糖原助沉)從100 μl同一5×105 copies/ml的HCV血清中提取的RNA作為模板檢測HCV所獲得的擴增曲線(RT-PCR一步法,50 μl擴增體系中加入全部純化的RNA)
五、實驗結論:
1.根據上圖可知,使用Simgen 病毒RNA純化試劑盒從HCV血清中提取RNA,經反轉錄后成功擴增出曲線,證明病毒總RNA試劑盒提取的RNA能夠滿足后續(xù)實驗需求。
2.根據上圖可知,使用Simgen 病毒RNA純化試劑盒從HCV血清中提取RNA,經反轉錄后擴增的曲線,較使用傳統(tǒng)Trizol法,PCR靈敏度更高。