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如何提高感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率？

作者：新景實驗室

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1. 細(xì)菌的生長狀態(tài)：實驗中應(yīng)密切注視細(xì)菌的生長狀態(tài)和密度，盡量使用對數(shù)生長期的細(xì)胞(一般通過檢測OD600來控制。DH5α菌株 OD600為 0.5 時細(xì)胞密度是 5 × 107/ml )；

2. 所有操作均應(yīng)在無菌條件和冰上進(jìn)行；

3. 經(jīng) CaCl₂處理的細(xì)胞，在低溫條件下，一定的時間內(nèi)轉(zhuǎn)化率隨時間的推移而增加，24小時達(dá)到最高，之后轉(zhuǎn)化率再下降(這是由于總的活菌數(shù)隨時間延長而減少造成的)；

4. 化合物及無機離子的影響：在Ca²⁺的基礎(chǔ)上聯(lián)合其他二價金屬離子(如 Mn²⁺或 Co²⁺)、 DMSO 或還原劑等物質(zhì)處理細(xì)菌，可使轉(zhuǎn)化效率大大提高( 100-1000倍)；

5. 所使用的器皿必須干凈。跡量的去污劑或其它化學(xué)物質(zhì)的存在可能大大降低細(xì)菌的轉(zhuǎn)化效率；

6. 質(zhì)粒的大小及構(gòu)型的影響：用于轉(zhuǎn)化的應(yīng)主要是超螺旋的DNA；

7.一定范圍內(nèi)，轉(zhuǎn)化效率與外源 DNA 的濃度呈正比。

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