在生物制品行業(yè)中，不同物種來源的同一生物制品價(jià)格差異較大，進(jìn)而催生了利用生物制品中殘留的DNA鑒定物種來源的技術(shù)。但由于現(xiàn)有市場上物種源性的鑒定技術(shù)主要以定性檢測為主，導(dǎo)致用戶收到的鑒定結(jié)果常常是一個(gè)產(chǎn)品中不同的物種都呈陽性，這給廣大用戶（特別是同一生產(chǎn)設(shè)備、車間生產(chǎn)有不同物種來源的同一生物制品的生產(chǎn)廠家）帶來了很大的疑惑：物種DNA鑒定的方法一點(diǎn)都不靠譜，不準(zhǔn)確或不靈敏。

實(shí)際上恰恰相反，由于PCR檢測太靈敏了，只要有幾個(gè)可作為DNA模板的分子存在，檢測結(jié)果就是陽性。本實(shí)驗(yàn)室近期收到山東一家生產(chǎn)血漿蛋白粉的廠家委托的檢測：他的一批豬血漿蛋白粉被鑒定為含有雞源DNA組份，懷疑是假冒的豬血蛋白粉，希望我們提供更有價(jià)值的檢測方法。

我們的建議是：請廠家提供一份純的雞血漿蛋白粉樣本和一份被懷疑是假冒豬血蛋白粉的樣本，一起用熒光定量PCR的方法鑒定其中雞源DNA的含量，如果兩者雞源DNA測出的含量相差懸殊，應(yīng)視為雞源DNA蛋白粉的污染，而不應(yīng)視為以雞源蛋白粉假冒豬源蛋白粉。

下面小編以為用戶鑒定雞源DNA濃度為例，比較定性鑒定與定量鑒定的差別：

實(shí)驗(yàn)樣本：雞肉，1號(hào)血漿蛋白粉樣本（雞源），2號(hào)血漿蛋白粉樣本（被懷疑是假冒豬血漿蛋白粉的雞血漿蛋白粉）

實(shí)驗(yàn)試劑：動(dòng)物組織DNA試劑盒（simgen，cat.No.：3101050），全血/培養(yǎng)細(xì)胞DNA試劑盒（simgen，cat.No.：3002050），PBS溶液（simgen，cat.No.：9004500）。

DNA提取步驟：

提取雞肉組織的基因組DNA按動(dòng)物組織DNA試劑盒說明書操作，用100μl Buffer TE 洗脫DNA。

血漿蛋白粉按以下步驟操作：

1. 取50mg血漿蛋白粉樣本溶于200μl PBS溶液，加20μl蛋白酶K混勻。

2. 然后按全血/培養(yǎng)細(xì)胞DNA試劑盒說明書（從全血、唾液、培養(yǎng)細(xì)胞、精液及革蘭氏陽性菌中分離純化總DNA）步驟二接下去操作，用100μl Buffer TE 洗脫DNA。

實(shí)驗(yàn)器材及差異步驟：

圖一PCR電泳圖  

M 1 2 3 4

M：DNA Marker

1：陽性對(duì)照

2：1號(hào)樣本

3：2號(hào)樣本

4：陰性對(duì)照

圖二 熒光PCR結(jié)果熒光曲線圖

圖三 熒光PCR探針法結(jié)果CT值表

從圖一可以看出1號(hào)樣本及2號(hào)樣本均呈現(xiàn)為與陽性條帶一致的帶型，陰性條帶為引物二聚體的帶型；2號(hào)樣本的電泳帶比1號(hào)的電泳帶稍暗，說明2號(hào)樣本中的雞源DNA比1號(hào)樣本少，但是并不能確定數(shù)量上差異多少。

我們再看圖二，1號(hào)樣本的熒光曲線起線比2號(hào)靠前，說明1號(hào)樣本的雞源DNA比2號(hào)多，再從圖三CT值表看，可以知道1號(hào)樣本的CT值比2號(hào)小6.45個(gè)CT值，說明1號(hào)樣本的雞源DNA比2號(hào)高2^6.43倍，即大約86倍。也就是說，如果要摻假的話，2號(hào)樣本中應(yīng)當(dāng)是取85份豬血漿蛋白粉+1份雞血漿蛋白粉混合而成的--這個(gè)摻假實(shí)在沒有利用價(jià)值，所以更好解釋應(yīng)當(dāng)是生產(chǎn)環(huán)境中的雞血漿蛋白粉殘留物污染了豬血漿蛋白粉。