真菌菌絲PCR

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/strong>

通過(guò)不同的方法處理真菌菌絲并進(jìn)行PCR，看是否能擴(kuò)出條帶。

實(shí)驗(yàn)設(shè)備與材料

快速DNA提取檢測(cè)試劑盒（simgen）、

2×Taq Plus PCR Master Mix（simgen）、

水浴鍋（XMTD-6000，上海宜昌儀器紗篩廠）、

離心機(jī)（5452，德國(guó)eppendorf股份公司）、

PCR儀（A-80343,Progene）、

漩渦振蕩儀（XH-C，金壇市醫(yī)療儀器廠）。

二、實(shí)驗(yàn)方法及步驟：

方法1：使用快速DNA提取檢測(cè)試劑盒

取真菌菌絲與潔凈的1.5ml離心管，加100μl裂解液，用研磨棒將菌絲研磨破碎，再加10μl蛋白酶K混勻，56℃水浴10min，95℃水浴5min（由于蛋白酶K會(huì)消化Taq酶，所以要使蛋白酶K失活，以免Taq酶被消化），取75μl 上清作為PCR模板待用。

配置PCR擴(kuò)增體系，加1/10體積模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增

方法2：直接PCR

配置PCR擴(kuò)增體系，將菌絲直接加入體系中進(jìn)行PCR擴(kuò)增

擴(kuò)增程序：

擴(kuò)增產(chǎn)物4℃保存。

取PCR產(chǎn)物進(jìn)行電泳

三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果：