一、材料：

1. 樣本：鳥(niǎo)羽毛，由客戶提供。

2. 微量DNA提取試劑盒（Simgen，Cat.No.3102050）

4. PCR擴(kuò)增試劑、引物為杭州新景生物試劑開(kāi)發(fā)有限公司自配或委托上海**生物技術(shù)有限公司合成。

5. PCR儀：Techne FPROGO5Y Progene Thermal

6. 離心機(jī)：Thermo Biofuge pico

二、方法：

1. 用Simgen微量DNA提取試劑盒分離純化鳥(niǎo)羽毛中的DNA。

2. 按下列組分配制PCR檢測(cè)試劑( 40 μl反應(yīng)體系)：

Master Mix(2×)              20.0 μl

上游引物FP                1.0 μl

下游引物RP                1.0 μl

dd H₂O                     13 μl

向每個(gè)PCR反應(yīng)管中加入35 μl反應(yīng)混合液，再加入5μl分離純化的DNA進(jìn)行PCR檢測(cè)。

注：陽(yáng)性對(duì)照用公鳥(niǎo)和母鳥(niǎo)的DNA作為模板，陰性對(duì)照用dd H₂O作為模板。

3. PCR循環(huán)條件設(shè)置：

4. 瓊脂糖凝膠電泳25 min。

三、結(jié)果判定：

有效性原則

1. 陰性對(duì)照：無(wú)擴(kuò)增條帶。

2. 陽(yáng)性對(duì)照：公的對(duì)照有一條擴(kuò)增條帶，母的對(duì)照有兩條擴(kuò)增條帶。

以上要求必須同時(shí)滿足，否則本次檢測(cè)無(wú)效。

結(jié)果：

1. 送檢的鳥(niǎo)羽毛鑒定為公鳥(niǎo)的羽毛。

2. 結(jié)果分析：

(1) 從電泳圖中的陽(yáng)性對(duì)照可以看出公鳥(niǎo)擴(kuò)增產(chǎn)物只有一條明顯可見(jiàn)的條帶，母鳥(niǎo)擴(kuò)增產(chǎn)物有兩條明顯可見(jiàn)的條帶。

(2) 從電泳圖中可以看出送檢羽毛提取的DNA擴(kuò)增產(chǎn)物有一條明亮的條帶和一條暗淡幾乎不可見(jiàn)的條帶，與公的陽(yáng)性對(duì)照較為符合，判斷送檢羽毛為公鳥(niǎo)的羽毛。而另一條隱約可見(jiàn)的條帶推測(cè)是母鳥(niǎo)樣本污染所致，例如公鳥(niǎo)長(zhǎng)期與母鳥(niǎo)關(guān)在一起，羽毛上可能沾染有母鳥(niǎo)的碎屑，導(dǎo)致擴(kuò)增出較暗的第二條帶，當(dāng)減少PCR擴(kuò)增循環(huán)次數(shù)后，這種污染條帶將更加暗淡不可見(jiàn)。 

PCR擴(kuò)增結(jié)果電泳圖：